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1待測樣品孔中每孔加入待測樣品100μl,，每種樣品設3個平行孔；設兩個陰性對照孔,，每孔加未處理組的細胞裂解液100μl,；另設一個空白對照孔，加入純細胞裂解液100μl,�,！�
2酶標板置4℃，包被過夜,。
3洗板：吸干孔內(nèi)反應液,，用洗滌液過洗一遍將洗滌液注滿板孔后，即甩去,，之后將洗滌液注滿板孔,，浸泡1-2分鐘,，間歇搖動。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干,。重復洗滌3-4次,。
4陰性對照孔每孔加入pbs 50μl，樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人aif抗體工作液50μl,�,！�
5酶標板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min,�,！�
6洗板，同4,�,！�
7每孔加1:5000稀釋的hrp-標記的山羊抗兔抗體工作液 100μl�,！�
8酶標板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),，孵育60min�,！�
9洗板,，同4�,！�
10每孔加tmb顯色液 100μl,，輕輕混勻10s，置37℃暗處反應15-20min,�,！�
11每孔加100μl 2mol/l h2so4終止反應�,！�
12分別測450nm 吸光值w1和630nm吸光值w2,，終測得的od值為兩者之差w1-w2，以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾,。
13數(shù)據(jù)處理：在得出標本s和陰性對照n的 od值后,，計算s/n值。s/n***2.1為陽性判定標準,。
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