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1待測樣品孔中每孔加入待測樣品100μl,，每種樣品設3個平行孔,；設兩個陰性對照孔,，每孔加未處理組的細胞裂解液100μl；另設一個空白對照孔,，加入純細胞裂解液100μl,。
2酶標板置4℃,，包被過夜,。
3洗板：吸干孔內(nèi)反應液，用洗滌液過洗一遍將洗滌液注滿板孔后,，即甩去,，之后將洗滌液注滿板孔，浸泡1-2分鐘,，間歇搖動,。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復洗滌3-4次,。
4陰性對照孔每孔加入pbs 50μl,，樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人aif抗體工作液50μl�,！�
5酶標板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),，孵育60min�,！�
6洗板,，同4�,！�
7每孔加1:5000稀釋的hrp-標記的山羊抗兔抗體工作液 100μl,。
8酶標板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),，孵育60min,。
9洗板,，同4,。
10每孔加tmb顯色液 100μl,，輕輕混勻10s,，置37℃暗處反應15-20min�,！�
11每孔加100μl 2mol/l h2so4終止反應,。
12分別測450nm 吸光值w1和630nm吸光值w2,，終測得的od值為兩者之差w1-w2,，以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾,。
13數(shù)據(jù)處理：在得出標本s和陰性對照n的 od值后，計算s/n值,。s/n***2.1為陽性判定標準,。
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