上海酶聯(lián)生物科技有限公司為您提供bos2大額牛皮膚成纖維樣細(xì)胞,。

細(xì)胞名稱:               bos2大額牛皮膚成纖維樣細(xì)胞
種屬來(lái)源:               大額牛
組織來(lái)源:               皮膚
特      征:               正常
細(xì)胞形態(tài):               成纖維細(xì)胞樣
生長(zhǎng)特性:               貼壁生長(zhǎng)
培 養(yǎng) 基:               dmem培養(yǎng)基,，90%,；fbs,，10%,。
生長(zhǎng)條件:               氣相：空氣,，95%,；---,，5%; 溫度：37 ℃,
傳代方法:               1：2至1：6,，每周2次,。
凍存條件:               90% 完全培養(yǎng)基+10% dmso，液氮儲(chǔ)存
支原體檢測(cè):             陰性


特點(diǎn)和簡(jiǎn)介
該細(xì)胞系來(lái)源于一雌性大額牛的耳部皮膚組織,，2010年由中科院昆明細(xì)胞庫(kù)建立,。


接受后處理
1) 收到細(xì)胞后，請(qǐng)檢查是否漏液 ,，如果漏液,，請(qǐng)拍照片發(fā)給我們,。


2) 請(qǐng)先在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞生長(zhǎng) 狀態(tài)，去掉封口膜并將t25瓶置于37℃培養(yǎng)約2-3h,。


3) 棄去t25瓶中的培養(yǎng)基,，添加 6ml本公司附帶的完全培養(yǎng)基。


4) 如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%請(qǐng)及 時(shí)進(jìn)行細(xì)胞傳代,，傳代培養(yǎng)用6ml本公司附帶的完全培養(yǎng)基,。


5) 接到細(xì)胞次日，請(qǐng)檢查細(xì)胞是 否污染,，若發(fā)現(xiàn)污染或---污染,，請(qǐng)及時(shí)與我們?nèi)〉寐?lián)系。


培養(yǎng)操作
1復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1ml 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加 入 4ml 培養(yǎng)基混合均 勻,。在 1000rpm 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液,，補(bǔ) 加 1-2ml 培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過(guò)夜或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基,，培養(yǎng)過(guò)夜,。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度。


2細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%,，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。


1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣,、鎂離子的 pbs 潤(rùn)洗細(xì)胞 1-2 次,。


2. 加 1ml ---液0.25%trypsin-0.53mm edta于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中--- 1-2 分鐘,，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞---情況,，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái),，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化,。


3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出,，在 1000rpm 條件下離心 4 分 鐘,，棄去上清液，補(bǔ)加 1-2ml 培養(yǎng)液后吹勻,。


4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。


3細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)---時(shí),，可進(jìn)行細(xì)胞凍存,。下面 t25 瓶為類,；


1. 細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后,，pbs 清洗一遍后加入 1ml 胰酶,，細(xì)胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止---,，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù),。


2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細(xì)胞,，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加 入血 清和 dmso,，輕輕混勻，dmso 終濃度為 10%,，細(xì)胞密度不低于1x106/ml,，每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液，注意凍 存管做好標(biāo)識(shí),。


3. 將凍存管置于程序降溫盒中,，放入-80 度冰箱，2 個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存,。記錄凍存管位置以便下次拿取,。





注意事項(xiàng)
1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液,、渾濁等現(xiàn)象,，若有上述現(xiàn) 象發(fā)生請(qǐng)及 時(shí)和我們聯(lián)系。


2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說(shuō)明書(shū),，了解細(xì)胞相關(guān)信息,，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基,、血清比例,、所 需細(xì)胞因子 等，---細(xì)胞培養(yǎng)條件一致,。若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問(wèn) 題,，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。


3. 用 75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面,，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài),。因運(yùn)輸問(wèn)題貼壁細(xì)胞會(huì)有少量 從瓶 壁脫落，將細(xì)胞置于培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng) 4~6 小時(shí),再取出觀察,。此時(shí)多數(shù)細(xì)胞均 會(huì)貼壁,，若細(xì)胞仍不能貼壁請(qǐng)用臺(tái)盼藍(lán) 染色測(cè)定細(xì)胞活力，如果證實(shí)細(xì)胞活力正常,， 請(qǐng)將細(xì)胞離心后用新鮮培養(yǎng)基再次貼壁培養(yǎng),；如果染色結(jié)果顯示細(xì)胞無(wú)活 力,，請(qǐng)拍下 照片及時(shí)和我們聯(lián)系，信息確認(rèn)后我們?yōu)槟�再免費(fèi)寄送一次,。


4.靜置細(xì)胞貼壁后,，請(qǐng)將細(xì)胞瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基倒出，留 6~8ml 維持細(xì)胞正常培養(yǎng),，待細(xì) 胞匯 合度  80%左右時(shí)正常傳代,。


5. 請(qǐng)客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)多余的培養(yǎng)基可收集備用,，細(xì)胞 傳代時(shí)可以 一定比例和客戶自備的培養(yǎng)基混合,，使細(xì)胞逐漸適應(yīng)培養(yǎng)條件。


6. 建議客戶收到細(xì)胞后前 3 天各拍幾張細(xì)胞照片,，記錄細(xì)胞狀態(tài),，便于和技術(shù) 部 溝通交流。由于運(yùn)輸?shù)脑���,，個(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián) 系，告知細(xì)胞的具體情況,，以便我們 的------回訪直至問(wèn)題解決,。


7.該細(xì)胞僅供科研使用。

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