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資陽PCR-南京英瀚斯生物科技-實時熒光定量PCR

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2022-10-13  
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22.同樣的od用page檢測,eb染色為什么深淺不一,?

答:通�,?梢杂胑b染色的方法來判斷雙鏈dna的量(如質粒dna),因為eb可以嵌合到雙鏈dna中,。而合成的單鏈dna,,由于堿基組成不同,,形成二級結構的可能性不同,eb的染色程度也會有差異,,pcr引物設計,,比如oligo(dt)等不形成二級結構,eb染色效果就非常差,。所以不要用eb染色的方法來定量,而用紫外分光光度計檢測,。同樣道理,,實時定量pcr,用eb染色來照片不適合所有引物,。

23.引物不純會有什么后果,?

答:引物不純可能會導致:1)非特-擴增;2)無法用預先設計在引物5′端酶切位點的酶切開,,-是沒有保護堿基的引物,;3) 用于測序出現(xiàn)雙峰或亂峰。解決辦法重新合成或重新純化,。

24.已經溶解的引物,,為什么原先使用正常,而過一段時間再使用就不好了,?

答:如果溶解引物的水ph過低或污染了菌或-酶,,會使引物降解。使用時沒有充分解凍混合,,液體不均勻也可能會造成引物加入量不準確,。建議分裝引物,避免反復凍溶,。建議使用10mmt ris ph7.5緩沖液溶解引物,,因為有些蒸餾水的ph值比較低ph4-5, 引物在這種條件下不穩(wěn)定,。還有一種可能性是引物沒有問題,,而是pcr使用材料-是模板的與先前使用的不完全一致。





單核苷酸多態(tài)性( snp )實驗

snp (single nucleotide polymorphisn即單核苷酸多態(tài)性 ,,是由于單個核苷酸改變而導致的-序列多態(tài)性(polymorphism),。據(jù)估計,在人類基因組中,,實時熒光定量pcr,,大約每千個堿基中有一個snp ,資陽pcr,,無論是比較于度多態(tài)性(rflp)分析還是微標記(str) ,,都要廣泛得多,。

實驗方法原理:

snp (single nucleotide polymorphisn即單核苷酸多態(tài)性,是由于單個核苷酸改變而導致的-序列多態(tài)性(polymorphism),。據(jù)估計,,在人類基因組中,大約每千個堿基中有一個snp ,,無論是比較于-性段長度多態(tài)性(rflp)分析還是微標記(str) ,,都要廣泛得多。snp是我們考察遺傳變異的單位,,據(jù)估計,,人類的所有群體中大約存在一千萬個snp位點。-般認為,,相鄰的snps傾向于一起遺傳給后代,。 于是,我們把位于染色體上某一區(qū)域的一組相關聯(lián)的snp等位位點稱作單體型( haplotype b大多數(shù)染色體區(qū)域只有少數(shù)幾個常見的單體型(每個具有至少5%的頻率),,它們代表了一個群體中人與人之間的大部分多態(tài)性,。-個染色體區(qū)域可以有很多snp位點,但是我們一-旦掌握了這個區(qū)域的單體型,,就可以只使用少數(shù)幾個標簽snps(tagsnp)來進行基因分型,,獲取大部分的遺傳多態(tài)模式。






腺-包裝原理介紹

腺-是一種沒有包膜的直徑為79-90nm的顆粒,,由252個 殼粒呈二十面體排列構成,。每個殼粒的直徑為7-9nm。衣殼里是線狀雙鏈dna分子,,兩端各有長約100bp的反向重復序列,。人體腺- 已知有33種,分別命名為ad1-ad33,,研究詳細得是ad2.

腺-是一種無包膜的球型結構的-,,遺傳物質為線型 雙股dna形式。腺-的特點:1gan染范圍廣對人致病性低,;2對增殖和非增殖細胞均具有gan染性,;3能有效進行增殖; 4-滴度高,;5不整合到染色體中,,無插入致突變性;(6)外源基因裝載容量大,。由于腺-的這些特點使其廣泛地應用于體 外基因轉導,、體內接種yi苗、和基因zhi療等各個領域,。

實驗方法

1.獲得目的基因序列,;

2.構建-表達載體質粒,;

3.表達載體質粒和包裝質粒重組;

4.gan染hek293,,包裝出-,;

5.-擴增、濃縮,;

6.滴度測定,。







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