11.如何溶解引物？
答：干燥后的引物質地非常疏松,，開蓋前好離心一下,，或管垂直向上在桌面上敲敲，將引物粉末收集到管底,。根據(jù)計算出的體積加入去離子無菌水或10mm tris ph7.5緩沖液，室溫放置幾分鐘,，振蕩助溶,，---怎么做，離心將溶液收集到管底,。溶解引物用的水一般不要用蒸餾水,，因為有些蒸餾水的ph值比較低ph4-5，pcr實驗室,，引物在這種條件下不穩(wěn)定,。
12.如何保存引物？
答：引物合成后,，經過一系列處理和純化步驟,，旋轉干燥而成片狀物質。引物在溶解前,，室溫狀態(tài)下可以長期保存,。溶解后的引物-20度可以長期保存。如果對實驗的重復性要求較高,，合成的od數(shù)較大,，建議分裝，避免反復凍融,。修飾熒光引物需要避光保存,。
分子實驗介紹——印跡western blot檢測
通過sds-page凝膠將細胞或生物樣品內的蛋白按照蛋白分子量從大到小規(guī)律分離開。經過page分離的蛋白質樣品,，轉移到固相載體例如纖維素薄膜或pvdf膜上,，固相載體以非共價鍵形式吸附蛋白質，且能保持電泳分離的多肽類型及其生物學活性不變。以固相載體上的蛋白質或多肽作為抗原,，與對應的起反應,，再與酶或同位素標記的第二起反應目前主要用hrp標記的第二，經過底物顯色或自顯影以檢測電泳分離的特---目的基因表達的蛋白成分目前主要使用魯米諾和二-的hrp反應發(fā)出熒光,，通過儀器或者膠片顯色,。該技術廣泛應用于檢測蛋白水平的表達。
實驗流程：細胞收集-細胞裂解,，蛋白提取-蛋白變性-sds-page電泳-蛋白質轉膜印記-蛋白封閉-目的孵育-二抗孵育-顯色拍照
結果示例：
圖 a不同大小的質粒轉染細胞后,，western blot檢測圖片；b a蛋白不同培養(yǎng)時間后western blot檢測圖片,；c 使用image pro plus軟件對a蛋白灰度檢測,，a蛋白表達變化統(tǒng)計圖
動物組織細胞基因組dna提取
操作步驟
1. 取新鮮或冰凍動物組織塊0.1g0.5cm3，盡量剪碎,。置于玻璃勻漿器中,，加入1ml的細胞裂解緩沖液勻漿至不見組織塊，轉入1.5ml 離心管中,，加入蛋白酶k
500ug/ml20μl,，混勻。在65℃恒溫水浴鍋中水浴30min,，也可轉入37℃水浴12～24h,，間歇振蕩離心管數(shù)次。于臺式離心機以12000 rpm離心5min,，取上清液入另
一離心管中,。
2.加2倍體積異，倒轉混勻后,，可以看見絲狀物,，用100ul 吸頭挑出，涼干,，黑龍江pcr,，用200ul te 重新溶解�,？蛇M行pcr反應等,，需要進一步純化的按下列步驟進行
3.加等量的酚??振蕩混勻，離心12000 rpm,，pcr引物設計,，5min。
4.取上層溶液至另一管,，加入等體積的?,，振蕩混勻,，離心12000 rpm，5min,。
5. 取上層溶液至另一管,，加入1/2體積的7.5mol/l氨加入2倍體積的無水---，混勻后室溫沉淀2min ,，離心12000 rpm ,，10min。
6.小心倒掉上清液,，將離心管倒置于吸水紙上,，將附于管壁的殘余液滴除掉。
7.用1ml 70%---洗滌沉淀物1次,，離心12000 rpm ,， 5min。
8.小心倒掉上清液,，將離心管倒置于吸水紙上,，將附于管壁的殘余液滴除掉，室溫干燥,。
9.加200ul te重新溶解沉淀物,，然后置于4℃或?c20℃保存?zhèn)溆谩?/p>
10.吸取適量樣品于genequant上檢測濃度和純度。
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