tcep 溶液,,0.5m(tcep solution)操作步驟一獲得目的基因1,、通過(guò)pcr方法:以含目的基因的質(zhì)粒為模板,,按基因序列設(shè)計(jì)一對(duì)引物在上游和下游引物分別引入不同的酶切位點(diǎn),pcr循環(huán)獲得所需基因片段,。2,、通過(guò)rt-pcr方法:用trizol法從細(xì)胞或組織中提取總rna,以mrna為模板,,逆轉(zhuǎn)錄形成cdna鏈,,以逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物為模板進(jìn)行pcr循環(huán)獲得產(chǎn)物。二構(gòu)建重組表達(dá)載體1,、tcep 溶液,,阻燃劑tcep 溶液,0.5m(tcep solution)載體酶切:將表達(dá)質(zhì)粒用-性?xún)?nèi)切酶同引物的酶切位點(diǎn)進(jìn)行雙酶切,,酶切產(chǎn)物行瓊脂糖電泳后,,用膠回收kit或凍融法回收載體大片段。2,、pcr產(chǎn)物雙酶切后回收,,在t4dna連接酶作用下連接入載體。
化學(xué)名稱(chēng):三(2-羧乙ji)lin[2]
英文名稱(chēng):tris(2-carboxyethyl)phosphinetcep
分子量:286.65
cas編碼:51805-45-9
理論氯含量:37.25%,;理論磷含量:10.85%,。
選用還原劑tcep(三羧已基鱗)作為打開(kāi)二硫鍵的試劑,與酸性蛋白酶同浴處理羊毛,。采用正交法設(shè)計(jì)酸性蛋白酶羊毛細(xì)化改性試驗(yàn)方案,,確定了主要影響因素及水平。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:影響羊毛強(qiáng)力和細(xì)度的主要因素是tcep與蛋白酶的用量,,而ph值與時(shí)間對(duì)細(xì)度與強(qiáng)力的影響不大,。佳處理工藝為:tcep用量2%(owf),,阻燃劑tcep廠家,酸性蛋白酶用量2%(owf),,達(dá)州阻燃劑tcep,,50℃處理90 min。經(jīng)過(guò)該工藝處理后的66支國(guó)產(chǎn)羊毛,,細(xì)度下降1.393μm,,強(qiáng)力保留71.2%。
|