石蠟切片制作流程1.取材:取材必須新鮮,切取材料時刀要銳利避免擠壓組織,,一般厚度不超過2mm,,大小不超過5×5mm2,取后立即投入固定液,。
2.固定:固定劑為組織塊體積的10~15倍,,一般為4%的中性-,固定時長24小時,。
3.脫水:70%酒精***85%酒精***90%酒精***95%酒精***無水-ⅰ***無水-ⅱ不同組織脫水時間不同
4.透明:透明劑能同時與脫水劑和石蠟混合,,它取代了脫水劑后,石蠟便能順利地滲入組織
常見的生物切片,,厚度一般在幾微米的程度,,這種厚度制作起來比較簡單,除了可以使用自動化的設(shè)備來切片之外,,香樟木質(zhì)部切片,,手動操作也能切到這種厚度,而且完夠滿足光學(xué)顯微鏡下觀察的標(biāo)準(zhǔn),。不過在的科研領(lǐng)域里,,需要觀察更細(xì)微的細(xì)胞結(jié)構(gòu),甚至需要從分子的層面來進(jìn)行研究,,這時候就需要用到電子顯微鏡,。然而電子顯微鏡也需要更薄的樣品,,切片至少要達(dá)到0.1微米的厚度,而這種切片也就被稱為是超薄切片,,在很多實驗研究里需要厚度達(dá)到50納米,,顯然手i操作是無法達(dá)到這種厚度的。那么在實驗環(huán)境下是怎樣做成這種超薄生物切片的呢?首先是需要進(jìn)行-的固定,,因為在如此薄的尺度之下,,不但基本的細(xì)胞結(jié)構(gòu)都已經(jīng)被完全破壞,而且其中的細(xì)胞器也都被切開,,里面的生物酶會釋放出來,,并且在很短的時間內(nèi)使細(xì)胞結(jié)構(gòu)遭到破壞。所以就需要在取得樣品之后盡快進(jìn)行固定,,要求在一-分鐘之 內(nèi)完成這項操作,,然后再使用對應(yīng)的材料來做透明化以及包埋,接下來還需要配合的切片機來完成切片的過程,,從而達(dá)到理想的厚度,。
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