蛋白提取
大部分蛋白質(zhì)都可溶于水,、稀鹽,、稀酸或堿溶液， 少數(shù)與脂類結(jié)合的蛋白質(zhì)則溶于---,、---等有ji溶劑中,，因些，-,，可 采用不同溶劑提取分離和純化蛋白質(zhì)及酶,。
(一)水溶液提取法
稀鹽和緩沖系統(tǒng)的水溶液對(duì)蛋白質(zhì)穩(wěn)定性好、溶解度大,、是提取蛋白質(zhì)常用的溶劑,，pcr引物設(shè)計(jì)，通常用量是原材料體積的1-5倍,，實(shí)時(shí)熒光定量pcr,，提取時(shí)需要均勻的攪拌，以利于蛋白質(zhì)的溶解,。提取的溫度要視有效成份性質(zhì)而定,。一方面，多數(shù)蛋白質(zhì)的溶解度隨著溫度的升高而增大,，因此,，溫度-于溶 解，縮短提取時(shí)間,。但另一方面. ,，溫度升高會(huì)使蛋白---性失活，因此,，基于這一點(diǎn)考慮提取蛋白質(zhì)和酶時(shí)一般采用低溫( 5度以下)操作,。為了避免蛋白質(zhì)提以過(guò)程中的降解，可加入蛋白 水解酶抑zhi劑(如二yi------,，云南pcr,，碘yi酸等)。
分子實(shí)驗(yàn)介紹——熒光檢測(cè)
細(xì)胞熒光染色是以熒光物質(zhì)標(biāo)記而進(jìn)行抗原定位的技術(shù)。在細(xì)胞中,，通過(guò)特定的標(biāo)記,，可以檢測(cè)目的蛋白表達(dá)量和表達(dá)定位。是細(xì)胞中的可直觀觀察細(xì)胞內(nèi)蛋白定位和表達(dá)的實(shí)驗(yàn)方法,。
實(shí)驗(yàn)流程：細(xì)胞固定-細(xì)胞膜破膜-蛋白封閉-目的蛋白結(jié)合-熒光二抗結(jié)合-dapi染色-熒光顯微鏡拍照或激光共-顯微鏡拍照。
結(jié)果示例：
細(xì)胞熒光染
通過(guò)觀察細(xì)胞中蛋白的熒光強(qiáng)度和定位分析該蛋白的表達(dá)變化,。
轉(zhuǎn)錄組測(cè)序
轉(zhuǎn)錄組即某個(gè)物種或特定細(xì)胞在某一功能狀態(tài)下產(chǎn)生的rna的總和,，是研究細(xì)胞表型和功能的一個(gè)重要手段。與基因組不同的是,，轉(zhuǎn)錄組的定義中包含了時(shí)間和空間的限定,。同一細(xì)胞在不同的生長(zhǎng)時(shí)期及生長(zhǎng)環(huán)境下，其基因表達(dá)情況是不相同的,。轉(zhuǎn)錄組測(cè)序rna-seq是指利用---代高通量測(cè)序技術(shù)進(jìn)行cdna測(cè)序,，快速地獲取某一物種特定qi官或組織在某一狀態(tài)下的轉(zhuǎn)錄本。相對(duì)于傳統(tǒng)芯片而言,，rna-seq無(wú)需預(yù)先設(shè)計(jì)探針,，即可對(duì)物種的細(xì)胞類型的轉(zhuǎn)錄組進(jìn)行檢測(cè)，能夠提供較的數(shù)字化信號(hào),，更高的檢測(cè)通量以及更廣泛的檢測(cè)范圍,，是目前深入研究轉(zhuǎn)錄組復(fù)雜性的---工具。
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