str檢測
短串聯(lián)重復(short tandem repeats,，pcr實驗室,， str)，又稱微wei星dna(microsatellite dna)或簡單重復序列(- repeat sequence,， srs或ssr),，是廣泛存在于原核生物和真核生物基因組中的核苷酸重復序列。有絲分裂過程中dna鏈之間的錯配引起的fu制滑動被認為是導致str產生的較為常見原因,，并且依據不同fu制單元大小的不同以及不同物種之間,，fu制滑動發(fā)生的概率也不相同。
str是以-序列 (core repeat units) 首尾相連多次重復形成,。每個str的-序列結構相同,，長度為2-6bp，但其重復單位數目和重復區(qū)域的長度不同,，因此str在不同種族,、不同人群之間的分布具有差-，構成了str遺傳多態(tài)性,。不同個體之間在一個同源str位點的重復次數也不同,，因而同指紋識別一樣,，str位點分析也可對個體進行身份識別。通過識別個體基因組在特定位點的特定序列重復,，即可創(chuàng)建其基因檔案,。基于此,，pcr引物設計,，str分析法已經成為一種重要的鑒定分析方法，應用于-學,、qin子鑒定及細胞鑒定等領域,。
轉錄組重測序
轉錄組測序的研究對象為特定細胞在某一功能狀態(tài)下所能轉錄出來的所有mrna的總和。轉錄組研究是基因功能及基因結構等研究的基礎,，pcr,，通過新一代高通量測序，能夠快速的獲得某一物種特定組織或在某一狀態(tài)下的幾乎所有轉錄本序列信息,，已廣泛應用于-診斷,、基礎研究和研發(fā)等領域。
轉錄組resequencing針對的是有參考基因組的物種,。用新一代高通量測序技術對某物種的特定組織或細胞進行轉錄組測序,，與參考基因組比較，可以得到基因表達差異,、可變剪接,、融合基因等遺傳調控信息。
dna測序檢測
1. pcr測序反應
(1)取0.2ml的pcr管,，用記號筆編號,，將管插在顆粒冰中，按下表加試劑:
所加試劑測定模板管標準對照管
bigdye mix
1μl
1μl
待測的質粒dna
1μ 1
pgem-3zf (+)雙鏈dna
-1μ1
待測dna的正向引物
1μ 1
m13(-21)引物- 1μ 1
滅菌去離子水
2μ 1
2μ 1
總反應體積5μ 1,，不加輕礦物油或石蠟油,，蓋緊pcr管，用手指彈管混勻,，稍離心,。
(2)將pcr管置于9600或2400型pcr儀.上進行擴增。98c變性2min后進行pcr循環(huán),，
pcr循環(huán)參數為96c 10s,， 50c 5s， 60°c4min,，-,， 25 個循環(huán)，擴增結束后設置4c保溫,。
2.-法純化pcr產物
(1) 將混合物離心,，將擴增產物轉移到1.5ml ep管中,。
(2)加入25μ 1/-混合液，充分振蕩,，置冰上10min以沉淀dna,。12 000r/min于
4c離心30 min，小心棄上清,。
(3)加70%(v/v)的-50μ 1 洗滌沉淀2次,。12 000r/min 于4c離心5min，小心棄上清和
管壁的液珠,，真空干燥沉淀10~ 15min,。
3.電泳前測序pcr產物的處理。
(1)加入12μ 1的tsr于離心管中,，劇烈振蕩,，讓其充分溶解dna沉淀，稍離心,。
(2)將溶液轉移至蓋體分離的0.2ml pcr管中,，稍離心,。
(3)在pcr儀上進行熱變性(95c 2min),，冰中驟冷，待_上機,。
4..上機操作按儀器操作說明書安裝毛細管,，進行毛細管位置的校正，人工手動灌膠和建立
運行的測序順序文件,。
5.儀器將自動進行序列分析,，并可根據用戶要求進行序列比較。如測序序列已知,，可通過
序列比較以星號標出差異堿基處,，提高工作效率。
6.測序完畢按儀器操作規(guī)程進行儀器清洗與保養(yǎng),。
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