步驟：(1)冷凍前24-48小時(shí)更換半量或全量培養(yǎng)基，使細(xì)胞處于指數(shù)生長(zhǎng)期,。(2)配制冷凍保存溶液(使用前配制)：另取一離心管,，加入培養(yǎng)基、,，逐滴加入二--- (dmso)至20%濃度,，即制成雙倍的凍存液，置于室溫下待用,。(3)離心收集培養(yǎng)之細(xì)胞,，用加的培養(yǎng)基重懸起細(xì)胞，取少量細(xì)胞懸浮液(約0.  1 ml)計(jì)數(shù)細(xì)胞濃度及凍前存活率,。(4)取與細(xì)胞懸液等量的凍存液,，緩慢逐滴加入細(xì)胞懸液，并晃動(dòng)試管,，制成細(xì)胞凍存懸液(dmsozui后濃度為5～10%),，使細(xì)胞濃度為1～5×106cells/ ml，混合均勻,，分裝于已標(biāo)示完全之冷凍保存管中,，1～2 ml/vial，并取少量細(xì)胞懸浮液作污染檢測(cè),。嚴(yán)密封口后,，注明細(xì)胞名稱、代數(shù),、日期,。然后進(jìn)行凍存。