---液相色譜法(hplc)是上個(gè)世紀(jì)七十年代迅速發(fā)展起來的一項(xiàng)---,、快速的分析分離技術(shù),,是現(xiàn)代分離測(cè)試的重要手段。
色譜法的分離原理是:溶于流動(dòng)相(mobile phase)中的各組分經(jīng)過固定相時(shí),,由于與固定相(station phase)發(fā)生作用(吸附,、分配、排阻,、親和)的大小,、強(qiáng)弱不同,在固定相中滯留時(shí)間不同,,從而先后從固定相中流出,。又稱為色層法、層析法,。
hplc是在---的液相色譜法基礎(chǔ)上發(fā)展起來的,,其以液體作為流動(dòng)相,并采用顆粒極細(xì)的---固定相的柱色譜分離技術(shù),。其分離機(jī)制與常規(guī)柱色譜相同,,但填料精細(xì),需高壓泵推動(dòng),,柱效高,,分析速度快。
與氣相色譜不同的是液相色譜中流動(dòng)相亦參與組分的分離過程,,其組成,、比例和ph值可靈活調(diào)節(jié),分離模式多樣,。在實(shí)際操作中主要通過改變流動(dòng)相的組成來調(diào)節(jié)樣品在色譜柱的保留值和選擇性,,從而使不同樣品得到分離。
---液相色譜法的應(yīng)用范圍十分廣泛,,對(duì)樣品的適用性廣,,---液相色譜價(jià)格,不受分析對(duì)象揮發(fā)性和熱穩(wěn)定性的---,,幾乎所有的化合物包括高沸點(diǎn),、極性,、離子型化合物和大分子物質(zhì)均可用---液相色譜法分析測(cè)定,---液相色譜多少錢,,因而彌補(bǔ)了氣相色譜法的不足,。在目前已知的有機(jī)化合物中,可用氣相色譜分析的約占20% ,,而80% 則需用---液相色譜來分析,。
現(xiàn)代色譜分析法是有效而快速的分離、分析手段,,既可用于定性分析,,又可用于定量分析。---液相色譜法與氣相色譜法的定性分析和定量分析方法包括測(cè)定方式和計(jì)算方法相同,。在定性分析中,,有用純物質(zhì)對(duì)照的色譜鑒定法,還有收集餾分與化學(xué)方法或其他儀器分析方法聯(lián)用的非色譜鑒定法,;在定量分析中,,可以用峰高或峰面積以內(nèi)標(biāo)法、外標(biāo)法或歸一化-量,,并與微機(jī)聯(lián)用作為現(xiàn)代化的分析工具,。
定性分析
色譜分析-性分析的目的就是確定每個(gè)色譜峰代表什么組分,從而確定由這些組分所構(gòu)成的混合物試樣的組成,。常用的主要定性方法有色譜鑒定法和非色譜鑒定法兩種,。
1.色譜鑒定-性
色譜鑒定法就是用純物質(zhì)對(duì)照定性,這是氣相和---液相色譜法中常用的方便的一種定性方法,,可以和定量測(cè)定操作同時(shí)進(jìn)行,。
(1)利用保留值定性
在色譜條件一定的情況下包括柱長(zhǎng)、柱內(nèi)徑,、固定相,、柱溫、流動(dòng)相及流速等,,每一種物質(zhì)都有其一定的保留值包括保留時(shí)間,、保留體積、調(diào)整保留時(shí)間,、調(diào)整保留體積等,,一般不受其他組分的影響,---液相色譜,,可以作為定性的根據(jù),。此法又稱為純物質(zhì)對(duì)照定性。
在相同的色譜條件下,先測(cè)定未知物中每個(gè)色譜峰的保留時(shí)間或保留距離,,再將要測(cè)的某純物質(zhì)注入色譜儀,,對(duì)照比較兩者的保留值,如果兩者的保留值相同,,就可判定該未知物與已知純物質(zhì)是同一種物質(zhì)。
(2)利用加入純物質(zhì)增加峰高-性
在穩(wěn)定的色譜條件下,,為了區(qū)分兩個(gè)保留值保留時(shí)間或保留距離非常接近的組分,,可以將某純物質(zhì)直接加入到試樣中,再注入色譜儀,,如果某組分峰的峰高增加了,,表明這個(gè)色譜峰就是加入的純物質(zhì)。此法又稱為純物質(zhì)追加-性,。
色譜鑒定-性需要有純物質(zhì)對(duì)照,,在沒有純物質(zhì)時(shí),可以用非色譜鑒定-性,。
hplc是在---的液相色譜法基礎(chǔ)上發(fā)展起來的,,其以液體作為流動(dòng)相,并采用顆粒極細(xì)的---固定相的柱色譜分離技術(shù),。其分離機(jī)制與常規(guī)柱色譜相同,,但填料精細(xì),需高壓泵推動(dòng),,---液相色譜,,柱效高,分析速度快,。與氣相色譜不同的是液相色譜中流動(dòng)相亦參與組分的分離過程,,其組成、比例和ph值可靈活調(diào)節(jié),,分離模式多樣,。在實(shí)際操作中主要通過改變流動(dòng)相的組成來調(diào)節(jié)樣品在色譜柱的保留值和選擇性,從而使不同樣品得到分離,。
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