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低溫保存法
簡(jiǎn)單保存法,，將瓊脂斜面孢子培養(yǎng)物、菌絲懸浮液以及由麩皮,、大米,、小米等谷物原料制成的孢子培養(yǎng)物置于4℃冰箱保存,保存時(shí)間不超過1～2個(gè)月，若將谷物原料制備的孢子瓶抽真空并在棉塞上浸蠟,以隔絕外界空氣和水汽,保持時(shí)間可達(dá)3～4個(gè)月,；
液氮---溫保存法,，將生長(zhǎng)穩(wěn)定期的細(xì)胞懸浮在10%甘油或其他低冰點(diǎn)液體中，密封于安瓿管內(nèi),，然后控制冷卻速度,，使安瓿管溫度逐步下降至 -35℃時(shí)，即可置于-150～-196℃的液氮罐中保存,。大多數(shù)微生物如---,、噬菌體、多種---,、酵母和原蟲,、---是一些用冷凍干燥法有困難的微生物，都可用此法長(zhǎng)期保存,。
脫水存法
沙土保存法,，能產(chǎn)孢子的---及霉菌可采用此法保存,即將沙和土以3:2比例混合,，經(jīng)稀酸處理洗凈過篩,裝入小試管內(nèi),裝置高度為1cm;滅菌2～3次，烘干后即可將在斜面培養(yǎng)基上生長(zhǎng)---的孢子,，用無菌蒸餾水2～2.5ml制成孢子懸液,，吸取少許加入沙土管中，經(jīng)真空抽干,，外觀呈松散狀態(tài),于4℃冰箱保存,，保存期可達(dá)5～7年。
冷凍干燥法,將孢子懸浮液與保護(hù)劑一般用脫脂牛奶相混合,，放在安瓿管內(nèi)于-20～-30℃的---浴中速凍,。然后，在低溫下用真空泵抽干,，并用氧化磷或干冰使水汽結(jié)凍,，熔封安瓿管，于低溫下保存,。保存期可達(dá)5～10年之久,。
石蠟油封存法，在斜面菌種培養(yǎng)物上,倒上滅菌后的石蠟油,，高出斜面1cm,，于4℃冰箱或低溫干燥處保存，此法不適用于能利用石蠟油作碳源的微生物,，保存期為一年以上,。
實(shí)驗(yàn)室的傳代保藏過程
1. 按說明書要求復(fù)溶菌粉，轉(zhuǎn)種于適當(dāng)?shù)脑鼍�培養(yǎng)基內(nèi)g1,，復(fù)壯后轉(zhuǎn)接至平板上,，并于適當(dāng)溫度下培養(yǎng)適當(dāng)時(shí)間，分離出單個(gè)純種菌落,，此為第2代g2,。
2. 鑒定完成后，挑取純菌落制成濃菌懸液用于制備甘油冷凍管,，同時(shí)挑取純菌落轉(zhuǎn)接斜面作為工作用,。此時(shí)，保藏為第2代,，但工作用則為第三代,。
3. 將第2代管冷凍保存，將工作用于適當(dāng)溫度下培養(yǎng)適當(dāng)時(shí)間后可用于試驗(yàn),。
4. 取一支冷凍保存的g2代轉(zhuǎn)種于平板和斜面培養(yǎng)基上,，平板上的制成冷凍保藏管第三代g3，斜面培養(yǎng)基經(jīng)適當(dāng)溫度下培養(yǎng)適當(dāng)時(shí)間后用作工作用w3,。
5. 將第三代g3冷凍或低溫保存,，將生長(zhǎng),、轉(zhuǎn)種后的g2經(jīng)滅菌處理后丟棄。
6. 當(dāng)工作用代數(shù)小于5時(shí),，可直接用上一代工作用轉(zhuǎn)接下一代工作用,，如w3可直接轉(zhuǎn)接為w4。
7. 按上述程序操作,，直至g4轉(zhuǎn)為w5為止,，需重新開啟安瓿，再重復(fù)上述操作程序,、保藏和使用,。
以上方法中，被分為兩類,。傳代用和工作用,，傳代用用于甘油冷凍管法保藏，工作用用斜面低溫保藏法保藏,。
實(shí)驗(yàn)證明,，甘油冷凍管的有效期至少為2年，但其主要適用于---需氧,、酵母菌的傳代,、保藏、---和芽孢類---則需應(yīng)用其它方法,。
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