上海莼試實業(yè)有限公司為您提供小鼠抵抗素樣蛋白αretnlaelisa試劑盒,。實驗原理
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中豬雄烯酮(adt)水平,。用純化的豬雄烯酮(adt)抗體包被微孔板,，制成固相抗體,，往包被單抗的微孔中依次加入雄烯酮(adt),，再與hrp標記的雄烯酮(adt)抗體結(jié)合,，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,，經(jīng)過-洗滌后加底物tmb顯色,。tmb在hrp酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的雄烯酮(adt)呈正相關(guān),。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度od值,，通過標準曲線計算樣品中豬雄烯酮(adt)濃度,。
標本要求
1．標本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行,，提取后應盡快進行實驗,。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存,，但應避免反復凍融
2．不能檢測含nan3的樣品,，因nan3抑制辣根---化物酶的hrp活性。
操作步驟
1.標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支,，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋,。
2.加樣：分別設(shè)空白孔空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同,、標準孔,、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,，然后再加待測樣品10μl樣品終稀釋度為5倍。加樣將樣品加于酶標板孔底部,，盡量不觸及孔壁,，輕輕晃動混勻。
3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘,。
4.配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5.洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體，甩干,，每孔加滿洗滌液,，靜置30秒后棄去，如此重復5次,，拍干,。
6.加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外,。
7.溫育：操作同3,。
8.洗滌：操作同5。
9.顯色：每孔先加入顯色劑a50μl,，再加入顯色劑b50μl,，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色10分鐘.
10.終止：每孔加終止液50μl,，終止反應此時藍色立轉(zhuǎn)黃色,。
11.測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度od值,。 測定應在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行,。
計算
以標準物的濃度為橫坐標,，od值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線,，根據(jù)樣品的od值由標準曲線查出相應的濃度,；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標準物的濃度與od值計算出標準曲線的直線回歸方程式,，將樣品的od值代入方程式,，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù),，即為樣品的實際濃度,。
注意事項
1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完,，板條應裝入密封袋中保存,。
2．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶,，洗滌時不影響結(jié)果,。
3．各步加樣均應使用加樣器，并經(jīng)常校對其準確性,，以避免試驗誤差,。一次加樣時間zui好控制在5分鐘內(nèi)，如標本數(shù)量多,，使用排槍加樣。
4．請每次測定的同時做標準曲線,，zui好做復孔,。如標本中待測物質(zhì)含量過高樣本od值大于標準品孔---孔的od值，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)n倍后再測定,，計算時請-乘以總稀釋倍數(shù)×n×5,。
5．封板膜只限-使用，以避免交叉污染,。
6．底物請避光保存,。
7．嚴格按照說明書的操作進行，試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.
8．所有樣品,，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理,。
9．本試劑不同批號組分不得混用。
保存條件及有效期
1．試劑盒保存：2-8℃,。
2．有效期：6個月
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