原理
原位雜交技術(shù)是在一定的溫度和離子濃度下,使具有特異序列的單鏈探針通過堿基互補規(guī)則與組織細胞內(nèi)待測的-復性結(jié)合而使得組織細胞中的特--得到定位,,并通過探針上所標記的檢測系統(tǒng)將其在-的原有位置上顯示出來,。
經(jīng)特定標記的核苷酸鏈為探針,植物rna原位雜交技術(shù)服務(wù),,可與組織切片、細胞或染色體標本中的待檢dn-段或mrna進行雜交,然后顯示標記物,,從而分析待檢-的分布和含量。利用此項技術(shù)可研究各種基因在染色體上的定位,,編碼某種蛋白質(zhì)的mrna在胞質(zhì)中的表達,。
水稻種子是人類重要的食物來源,其發(fā)育涉及一個復雜的調(diào)控網(wǎng)絡(luò),,其中轉(zhuǎn)錄因子發(fā)揮了關(guān)鍵作用,。mads轉(zhuǎn)錄因子家族成員是植物花器1官發(fā)育的重要調(diào)控因子,已有的研究表明,,幾乎所有的水稻mads基因都在種子中表達,,但對mads家族成員參與水稻種子發(fā)育調(diào)控的研究結(jié)果仍比較少。
在這項研究中,,研究組基于前期的表達譜研究基礎(chǔ),,分析得到了一個在水稻生殖發(fā)育階段優(yōu)先表達的轉(zhuǎn)錄因子mads29。細致分析表明,,mads29在花藥,、胚珠和種子中均表達,且在受精后的母體組織表達量高,。mads29的反義轉(zhuǎn)1基因植株呈現(xiàn)種子皺縮,、淀粉粒形態(tài)異常、灌漿速率下降等表型,。通過解剖學切片,、末端轉(zhuǎn)移酶標記實驗和全基因組表達譜芯片分析等,研究人-明了mads29通過調(diào)控程序化死1亡(pcd)過程促進珠心細胞和珠心突起處的降解,。進一步的體外凝膠阻滯實驗顯示,,mads29能夠通過直接結(jié)合程序化死1亡相關(guān)基因的啟動子區(qū)域而調(diào)控其表達,,進而影響胚乳發(fā)育。
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