凍存袋細(xì)胞復(fù)蘇操作步驟

1.操作人員應(yīng)戴防護(hù)面罩及手套,，防止冷凍管可能爆裂之傷害,。

2.自液氮或干冰容器中取出冷凍管，檢查蓋子是否旋緊,，由于熱脹冷縮過程,，此時蓋子易松掉。

3.將新鮮培養(yǎng)基置于37℃水槽中回溫,，回溫后噴以70酒精并擦拭之,，移入無菌操作臺內(nèi)。

4.取出冷凍管,，立即放入3℃水槽中快速解凍,，輕搖冷凍管使其在1分鐘內(nèi)全部融化，以7o%酒精擦拭保存管外部,，移入無菌操作臺內(nèi),。

5.取出解凍之細(xì)胞懸浮液，緩緩加入有培養(yǎng)基之培養(yǎng)容器內(nèi)(稀釋比例為1:10~1:15),，混合均勻,，cs250凍存袋供應(yīng)商，放入培養(yǎng)箱培養(yǎng),。取0.1m1解凍細(xì)胞懸浮液作存活測試,。

6.解凍后是否立即去除冷凍保護(hù)劑，依細(xì)胞種類而異,，一般而言,，大都不需要立即去除冷凍保護(hù)劑,。惟若要立即去除，則將解凍之細(xì)胞懸浮液加入含有5-10m1培養(yǎng)基之離心管內(nèi),，離心 1000rpm,，5分鐘，200-074-401凍存袋供應(yīng)商,，移去上清液,，加入新鮮培養(yǎng)基，混合均勻,，放入培養(yǎng)箱培養(yǎng),。

細(xì)胞凍存離心問題

目前主要有兩種見解。一種是解凍后的細(xì)胞懸液直接吹打均勻后分裝到培養(yǎng)瓶中進(jìn)行培養(yǎng),，第二天換液,。因為離心的目的是兩個，去除 dmso,，去除---,，cs50凍存袋供應(yīng)商，這個是標(biāo)準(zhǔn)流程,，但對一般人來說,，把握不好離心轉(zhuǎn)速和時間，轉(zhuǎn)的不夠沉底的少,，細(xì)胞就全被扔掉了,，轉(zhuǎn)過了會受壓過大， ,。此外在操作過程中容易污染,，所以不。另一種說法為細(xì)胞懸液中含有二---dmso,，dmso對細(xì)胞有一定的毒副作用,，所以須將離心后的液 體前倒凈，且一定倒干凈,。我在試驗中按照常規(guī)的離心分裝的方法進(jìn)行復(fù)蘇,，結(jié)果無有異常。